轻工学报

作者：魏涛, 赵彩梦, 郏未未, 黄申, 毛多斌

单位：1.郑州轻工业大学食品与生物工程学院,河南郑州450001;2.河南省食品生产与安全协同创新中心,河南郑州450001

关键词：果糖基转移酶, 毕赤酵母, 表达, 纯化, 酶学性质

基金：国家自然科学基金项目（21406210）；河南省高校科技创新人才项目（18HASTIT040）；河南省留学人员科技活动项目（2019-3）

利用基因工程技术方法，将构建的重组质粒pPICZαA-AoFT线性化后，经电转化导入毕赤酵母X33（Pichia pastoris X33）中，构建重组毕赤酵母工程菌pPICZαA-AoFT/X33，实现果糖基转移酶AoFT在毕赤酵母中的表达，进而研究纯化后的果糖基转移酶AoFT的酶学性质.结果表明：pPICZαA-AoFT/X33随发酵时间的增加而快速繁殖，菌体OD600值于发酵时长120 h时达到峰值，此时发酵液胞外总蛋白质量浓度为1.64 mg/mL；纯化后的果糖基转移酶AoFT的比活力为71.4 U/mg，产率达70.6%；PNGase F酶切反应证实纯化后的果糖基转移酶AoFT发生了N-糖基化反应；果糖基转移酶AoFT的最适反应温度为45℃，最适缓冲体系为醋酸钠缓冲液（pH值为4.5~6.0）；金属离子Mn2+，Ca2+对果糖基转移酶AoFT具有激活作用，而Al3+，Fe2+，Ni2+，Zn2+和EDTA对果糖基转移酶AoFT具有抑制作用；表面活性剂SDS，吐温20和Triton X-100对果糖基转移酶AoFT的酶活性影响较小，还原剂DTT对果糖基转移酶AoFT的酶活性具有明显的抑制作用，酶抑制剂PMSF低浓度时对果糖基转移酶AoFT的酶活性无显著影响，高浓度时可使酶活性降低；果糖基转移酶AoFT对有机溶剂乙醇、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、正丁醇、正己烷和甲苯具有较强的抗性.

来源：2020年第3期

《轻工学报》期刊编辑部

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