轻工学报

作者：胡海艳, 甘祥武, 黄秀敏, 叶俊豪, 谢万勇

单位：广州市微生物研究所,广东广州510663

关键词：<i>β</i>-甘露聚糖酶, 易错PCR, 定向进化

基金：广州市科技计划项目（201710010154）

采用易错PCR方法，对β-甘露聚糖酶进行体外分子定向进化，通过调整dNTP比例和加入不同浓度的Mn2+，向β-甘露聚糖酶中随机引入突变，构建突变文库，并对筛选得到的突变菌株的突变酶酶学性质进行研究.结果表明：在突变文库的构建过程中，当Mn2+浓度为0.01 mmol/L时，阳性转化率最高，达到80%，氨基酸的突变个数为2.0个，符合易错PCR突变文库的构建原则；经过两轮易错PCR构建的突变文库库容量约为4000，从中筛选出的突变毕赤酵母菌X-33/pGAPZαA-GwMan26A-27的突变酶GwMan26A-27具有耐酸、耐高温且酶活力较高的特性；与突变前相比，GwMan26A-27具有较宽的酶促反应温度范围和适宜pH值范围，热稳定性和pH稳定性均有较大提升；在胃蛋白酶液和胰蛋白酶液中水浴2 h，GwMan26A-27的消化酶稳定性较突变前也均有所提升.

来源：2020年第4期

《轻工学报》期刊编辑部

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