轻工学报

作者：张轲, 杨金初, 赵旭, 童治军, 李萌, 徐永明, 张展, 孙九喆

单位：1.云南省烟草质量监督检测站,云南昆明650106;2.河南中烟工业有限责任公司技术中心,河南郑州450000;3.云南省烟草农业科学研究院/烟草行业烟草生物技术育种重点实验室/国家烟草基因工程研究中心,云南昆明650021;4.郑州轻工业大学食品与生物工程学院,河南郑州450001

关键词：烟草属特异性基因, <i>Ntsp</i>151, 环介导等温扩增, 可视化, 基因组

基金：云南省烟草专卖局(公司)重点项目(2020530000241034)；河南中烟工业有限责任公司科技计划项目(ZW2015012)

针对烟草属特异性基因Ntsp151序列保守区设计环介导等温扩增(LAMP)引物,基于SYBR Green I荧光染料对烟草材料进行可视化LAMP检测,对检测过程中的DNA提取方法和反应条件进行优化,并对LAMP反应体系的特异性和灵敏度进行评价。结果表明:使用Chelex-100提取的DNA可以直接进行LAMP扩增反应,显色效果较好;LAMP最适反应条件为扩增温度63 ℃、反应时间60 min、Mg2+浓度6 mmol/L;LAMP对17份非烟草材料和1份烟草材料基因组DNA的扩增显色结果与荧光值的检测结果一致,具有较好的特异性,其最低检测限为102 copies/μL。基于烟草属特异性基因Ntsp151的LAMP检测结果可视化强,且灵敏度高、特异性强,适用于现场抽检。

来源：2023年第2期

《轻工学报》期刊编辑部

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